-
1 pBR322
Плазмида plasmid E.coli, одна из первых примененных в качестве многоцелевого вектора cloning vector для клонирования генетического материала Ф.Боливаром с сотр. в 1977; в настоящее время по-прежнему широко используется, содержит гены устойчивости к тетрациклину и ампициллину (наличие такой пары генов позволяет одновременно идентифицировать бактерию-носительницу плазмиды и отличать химерную плазмиду chimaeric plasmid от родительской), а также несколько удобных сайтов рестрикции.* * *pBR322 — серия сравнительно небольших, мультикопийных и неконъюгативных плазмидных векторов клонирования, содержащих гены устойчивости к ампициллину и тетрациклину, а также несколько уникальных сайтов клонирования (или полилинкеры, см.). Сайты клонирования локализованы в пределах одного из генов устойчивости. Это позволяет обнаруживать инсерцированную чужеродную ДНК по исчезновению устойчивости к антибиотику на селективной среде. Плазмида синтезирована в 1977 г. мексиканскими исследователями Боливаром и Родригесом. Они использовали ген тетрациклин-устойчивости от pSC101, ориджин репликации ori (см. Ориджин) и rеp-ген от Сol E1, а ген ампициллин-устойчивости — от транспозона Tn3 (см. Транспозон). Плазмида реплицируется в E. coli под ослабленным контролем.Англо-русский толковый словарь генетических терминов > pBR322
-
2 pGV3850
pGV3850-вектор — конъюгативный вектор для переноса чужеродных генов в растения с помощью агробактерий. pGV3850-в. является производным от Ti-плазмиды Agrobacterium tumefaciens, в которой T-область замещена модифицированной плазмидой pBR322. Она вставляется в T-область между левыми и правыми граничными последовательностями. Методом гомологичной рекомбинации во встроенный в pGV3850 фрагмент pBR322 c ампициллиновым геном инсерцируется чужеродная ДНК. Отбор агро-бактериальных клеток, содержащих коинтегративную структуру pGV3850, производится на селективной среде с ампициллином. Чужеродная ДНК, инсерцированная в pGV3850, переносится в клетки растений методом агробактериальной трансформации.Англо-русский толковый словарь генетических терминов > pGV3850
-
3 insertional inactivation
Прекращение экспрессии гена в результате вставки insertion; метод И.в. используется для выявления рекомбинантной ДНК при клонировании в плазмидных векторах по прекращению экспрессии селектируемого маркера.* * *Инсерционная инактивация — нарушение кодирующей области гена путем инсерции (включения, вставки) чужеродной ДНК, ведущее к потере функции гена, т. е. к прекращению его экспрессии. И. и. позволяет легко отбирать рекомбинанты после трансформации, напр., клонирование чужеродной ДНК в SalI сайт плазмиды pBR322 инактивирует ген устойчивости к тетрациклину, а ген устойчивости к ампицилину, содержащийся в этой плазмиде, остается интактным. Это позволяет после трансформации рекомбинантной плазмиды отбирать трансформанты на среде с ампициллином и тетрациклином по фенотипу ampr/tets.Англо-русский толковый словарь генетических терминов > insertional inactivation
-
4 agrobacterium-mediated
Агробактериальная трансформация, а. перенос генов — использование Agrobacterium tumefaciens или A. rhizogenes и их Ti- или Ri-плазмид для переноса чужеродных генов (ДНК) в реципиентный геном растений. Для этого ДНК сначала клонируется в подходящий вектор (напр., в коинтегративный или бинарный), который чаще всего делается на основе pBR322 и содержит фланкирующие последовательности из Ti-плазмиды (левый и правый конец Т-ДНК). Такая конструкция трансформируется в к.-л. подходящий штамм E. coli, размножается и переносится в клетки агробактерий. При инкубации агробактерии с протопластами, листовыми дисками или др. частями растения vir-область Ti (Ri)-плазмиды активируется веществами, выделяемыми поврежденными клетками растения (напр., ацетосирингон). В результате T-район с чужеродной ДНК вырезается из плазмиды и копия одной нити Т-ДНК пакетируется с белком, переносится в растительную клетку и там интегрирует в ее ядерный геном.
Англо-русский толковый словарь генетических терминов > agrobacterium-mediated
-
5 gapped duplex mutagenesis
Гэповый дуплексный мутагенез — введение (внесение) мутаций в молекулу ДНК путем использования ДНК с однонитчатыми участками, или гэпами. Такие молекулы ДНК могут быть образованы путем гибридизации однонитчатой ДНК-вектора (напр., pBR322, см.), несущей инсерцию, с гомологичной однонитчатой ДНК-вектором, не имеющей инсерции. В результате воссоединения этих двух однонитчатых последовательностей образуется двунитчатая молекула, внутри которой ДНК будет однонитчатой в районе инсерции из-за отсутствия гомологии. Затем проводят гибридизацию соответственно подобранного олигодезоксинуклеотидного праймера, состоящего из 16-18 оснований и несущего один или более несовпадающих нуклеотидов. С помощью ДНК-полимеразы I брешь заполняется и ковалентно зашивается ДНК-лигазой. После трансфекции в бактерию мутанты идентифицируются с помощью соответствующей техники отбора. В процессе репарационного синтеза (см. Репарация) в ДНК могут вводиться также аналоги оснований.Англо-русский толковый словарь генетических терминов > gapped duplex mutagenesis
-
6 gene transfer
Агробактериальная трансформация, а. перенос генов — использование Agrobacterium tumefaciens или A. rhizogenes и их Ti- или Ri-плазмид для переноса чужеродных генов (ДНК) в реципиентный геном растений. Для этого ДНК сначала клонируется в подходящий вектор (напр., в коинтегративный или бинарный), который чаще всего делается на основе pBR322 и содержит фланкирующие последовательности из Ti-плазмиды (левый и правый конец Т-ДНК). Такая конструкция трансформируется в к.-л. подходящий штамм E. coli, размножается и переносится в клетки агробактерий. При инкубации агробактерии с протопластами, листовыми дисками или др. частями растения vir-область Ti (Ri)-плазмиды активируется веществами, выделяемыми поврежденными клетками растения (напр., ацетосирингон). В результате T-район с чужеродной ДНК вырезается из плазмиды и копия одной нити Т-ДНК пакетируется с белком, переносится в растительную клетку и там интегрирует в ее ядерный геном.Англо-русский толковый словарь генетических терминов > gene transfer
-
7 pUC vector
pUC-вектор — один из серии относительно мелких E. coli-плазмидных векторов клонирования, содержащий PvuII/EcoR1-фрагмент из pBR322 с β-лактамазным геном, кодирующим ампициллин-устойчивость, ориджином репликации и последовательностями, кодирующими α-пептид lac Z-гена (β-галактозидазы) с полилинкером. Инсерция чужеродной ДНК в полилинкер приводит к нарушению α-пептидного гена и, следовательно, синтеза функционального белка. В этом случае хозяйская клетка образует бесцветные колонии, если она растет на среде с ампициллином и X-gal. Штаммы, трансформированные нерекомбинантными векторами, образуют голубые колонии на той же среде. Т. обр., можно легко отбирать рекомбинантные (т.е. с чужеродной ДНК) колонии.Англо-русский толковый словарь генетических терминов > pUC vector
См. также в других словарях:
pBR322 — pBR322. Плазмида <plasmid> E.coli, одна из первых примененных в качестве многоцелевого вектора <cloning vector> для клонирования генетического материала Ф.Боливаром с сотр. в 1977; в настоящее время по прежнему широко используется,… … Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь.
pBR322 — — серия сравнительно небольших, мультикопийных и неконъюгативных плазмидных векторов клонирования (см.), содержащих гены устойчивости к ампициллину и тетрациклину, а также несколько уникальных сайтов клонирования (или полилинкеров, см.). Сайты… … Генетика. Энциклопедический словарь
PBR322 — Карта плазмиды pBR 322 pBR322 плазмида, используемая в бактериях E. coli как вектор клонирования. Создана в 1977 году мексиканскими биологами … Википедия
PBR322 — Plasmidkarte von pBR322 Das Plasmid pBR322 wurde 1977 von Francisco Bolivar und Raymond Rodriguez konstruiert und war eines der ersten künstlich hergestellten Plasmide.[1] Es ist ein Derivat eines R Plasmids, das einen Replikationsursprung oriV… … Deutsch Wikipedia
pBR322 — Schematische Plasmidkarte von pBR322. Die Gene für die Ampicillinresistenz, der Tetracyclinresistenz sowie den Replikationsursprung sind eingezeichnet. Die Basenpaarposition beispielhafter Restriktionsschnittstellen ist in blau hervorgehoben. Das … Deutsch Wikipedia
PBR322 — The vector pBR322 with exemplified restriction sites. pBR322 is a plasmid and was the first widely used E. coli cloning vectors. Created in 1977, it was named after its Mexican creators, p standing for plasmid, and BR for Bolivar and Rodriguez.… … Wikipedia
pBR322 — One of the first plasmids used for cloning DNA in E. coli … Glossary of Biotechnology
GÉNIE GÉNÉTIQUE — La recombinaison génétique consiste en un échange de gènes entre deux chromosomes. Chez l’homme, elle est un événement systématique au cours de la formation des cellules reproductrices, ovules ou spermatozoïdes. Les recombinaisons multiples qui… … Encyclopédie Universelle
Insertional mutagenesis — is mutagenesis of DNA by the insertion of one or more bases.[1] Insertional mutations can occur naturally, mediated by virus or transposon, or can be artificially created for research purposes in the lab. Contents 1 Signature tagged mutagenesis 2 … Wikipedia
pUC19 — Schematische Plasmidkarte von pUC19. Die Gene für die Ampicillinresistenz, den Replikationsursprung sowie der Polylinker (blau) sind eingezeichnet. pUC19 und pUC18 sind künstlich hergestellte, bakterielle Plasmide, die zu den am häufigsten… … Deutsch Wikipedia
Plasmidkopienzahl — Die Plasmidkopienzahl beschreibt die Zahl an Plasmiden einer Art pro Zelle. Man unterscheidet zwischen low copy Plasmidkopienzahl zwischen 1–12 pro Zelle medium copy Plasmidkopienzahl zwischen 15–20 pro Zelle high copy Plasmidkopienzahl zwischen… … Deutsch Wikipedia
