-
41 expression of polymerase chain reaction
Экспрессия ПЦР — техника, объединяющая ПЦР, или полимеразную цепную реакцию, с транскрипцией и трансляцией in vitro определенного фрагмента ДНК (гена) с тем, чтобы получить амплифицированный продукт (белок) (см. Амплификация). Для этого интересующий ген сначала амплифицируют с помощью ген-специфичного смыслового и антисмыслового праймеров. 5'-конец смыслового праймера содержит область из 12 перекрывающихся п. о. После процедуры амплификации этот участок удлиняется с помощью Taq-полимеразы путем присоединения экспрессионной кассеты, содержащей сайт инициации транскрипции для Т 7 РНК-полимеразы, 5'-нетранслируемую лидерную последовательность из вирусного гена и стартовый кодон ATG. Лидерная последовательность, в свою очередь, несет сайт для связывания с рибосомами. Затем такая рекомбинантная молекула амплифицируется с помощью универсального и антисмыслового праймеров. Образующийся ПЦР-продукт in vitro транскрибируется в иРНК, а затем транслируется в белок.Англо-русский толковый словарь генетических терминов > expression of polymerase chain reaction
-
42 gapped duplex mutagenesis
Гэповый дуплексный мутагенез — введение (внесение) мутаций в молекулу ДНК путем использования ДНК с однонитчатыми участками, или гэпами. Такие молекулы ДНК могут быть образованы путем гибридизации однонитчатой ДНК-вектора (напр., pBR322, см.), несущей инсерцию, с гомологичной однонитчатой ДНК-вектором, не имеющей инсерции. В результате воссоединения этих двух однонитчатых последовательностей образуется двунитчатая молекула, внутри которой ДНК будет однонитчатой в районе инсерции из-за отсутствия гомологии. Затем проводят гибридизацию соответственно подобранного олигодезоксинуклеотидного праймера, состоящего из 16-18 оснований и несущего один или более несовпадающих нуклеотидов. С помощью ДНК-полимеразы I брешь заполняется и ковалентно зашивается ДНК-лигазой. После трансфекции в бактерию мутанты идентифицируются с помощью соответствующей техники отбора. В процессе репарационного синтеза (см. Репарация) в ДНК могут вводиться также аналоги оснований.Англо-русский толковый словарь генетических терминов > gapped duplex mutagenesis
-
43 Kornberg polymerase
ДНК-полимераза I, Pol I, Корнберга полимераза — фермент E. coli размером в 109 кД. ДНК-п.I необходима для репарации и репликации ДНК in vivo. ДНК-п.I дополнительно обладает 3' → 5'-полимеразной активностью при наличии затравки ( праймера, см.) и матрицы. Фермент обладает 3' → 5'-экзонуклеазной активностью (экзонуклеаза II), что позволяет удалять нуклеотиды с праймерной нити, и 5' → 3'-экзонуклеазной активностью (экзонуклеаза VI), позволяющей удалять нуклеотиды перед растущей праймерной нитью. Широко известен фрагмент в 76 кД этой полимеразы (фрагмент Кленова), обладающий полимеразной и 3' → 5'-экзонуклеазной функциями. Как полный фермент, так и фрагмент Кленова используются для мечения ДНК in vitro методом ник-трансляции и для заполнения 3'-концов в дуплексной молекуле ДНК (см. ДНК-полимеразы).Англо-русский толковый словарь генетических терминов > Kornberg polymerase
-
44 linear amplification DNA sequencing
Линейной амплифицированной ДНК секвенирование, л. с. при ПЦР — техника секвенирования нативной двунитчатой ДНК после ее амплификации методом полимеразной цепной реакции. Очищенную ДНК и меченый по 5'-концу секвенирующий праймер смешивают с четырьмя реакционными средами для секвенирования по Сэнгеру и добавляют Taq ДНК-полимеразу (см. Taq-полимераза). Реакционные смеси помещаются в амплификатор и по заданной температурной программе осуществляется многократная денатурация и отжиг матричной ДНК и праймеров. Удлинение праймера Taq-полимеразой идет до тех пор, пока инкорпорированный дидезоксинуклеотидтрифосфат не остановит реакцию. В результате образуется серия амплифицированных фрагментов, которые могут быть разделены электрофоретически (см. Электрофорез) на специальном гелед ля секвенирования. Метод позволяет определять до 500 и более оснований за один цикл, не требует большого количества ДНК.Англо-русский толковый словарь генетических терминов > linear amplification DNA sequencing
-
45 linear polymerase chain reaction sequencing
Линейной амплифицированной ДНК секвенирование, л. с. при ПЦР — техника секвенирования нативной двунитчатой ДНК после ее амплификации методом полимеразной цепной реакции. Очищенную ДНК и меченый по 5'-концу секвенирующий праймер смешивают с четырьмя реакционными средами для секвенирования по Сэнгеру и добавляют Taq ДНК-полимеразу (см. Taq-полимераза). Реакционные смеси помещаются в амплификатор и по заданной температурной программе осуществляется многократная денатурация и отжиг матричной ДНК и праймеров. Удлинение праймера Taq-полимеразой идет до тех пор, пока инкорпорированный дидезоксинуклеотидтрифосфат не остановит реакцию. В результате образуется серия амплифицированных фрагментов, которые могут быть разделены электрофоретически (см. Электрофорез) на специальном гелед ля секвенирования. Метод позволяет определять до 500 и более оснований за один цикл, не требует большого количества ДНК.Англо-русский толковый словарь генетических терминов > linear polymerase chain reaction sequencing
-
46 oligomismatch mutagenesis
Олигонуклеотид-направленный мутагенез, м.ошибочного спаривания нуклеотидов — техника (метод) введения сайт-специфических мутаций (см. Сайт-специфический мутагенез) в молекулу ДНК путем отжига (присоединения) специально синтезированных олигодезоксинуклеотидов (от 7 до 20). Олигонуклеотиды должны быть комплементарны участку, который мутируется, за исключением одного или нескольких оснований. После их гибридизации с денатурированной ДНК-мишенью (обычно вставленной в клонирующий вектор дикого типа) с помощью фрагмента Кленова (см. Кленова фрагмент) синтезируется полная комплементарная нить. При этом в качестве праймера используется образовавшийся после гибридизации двунитчатый участок ДНК. Сформировавшаяся двунитчатая молекула ДНК переносится в E. coli, где ДНК претерпевает процесс репарации ошибок спаривания нуклеотидов. В результате образуется смесь молекул, в которой 50% нитей ДНК являются нормальными (т. е. дикого типа), а 50% несут ошибочные (неправильные) нуклеотиды, содержавшиеся в праймере, т. е. являются специфически мутировавшими клонами.Англо-русский толковый словарь генетических терминов > oligomismatch mutagenesis
-
47 PCR-expression
Экспрессия ПЦР — техника, объединяющая ПЦР, или полимеразную цепную реакцию, с транскрипцией и трансляцией in vitro определенного фрагмента ДНК (гена) с тем, чтобы получить амплифицированный продукт (белок) (см. Амплификация). Для этого интересующий ген сначала амплифицируют с помощью ген-специфичного смыслового и антисмыслового праймеров. 5'-конец смыслового праймера содержит область из 12 перекрывающихся п. о. После процедуры амплификации этот участок удлиняется с помощью Taq-полимеразы путем присоединения экспрессионной кассеты, содержащей сайт инициации транскрипции для Т 7 РНК-полимеразы, 5'-нетранслируемую лидерную последовательность из вирусного гена и стартовый кодон ATG. Лидерная последовательность, в свою очередь, несет сайт для связывания с рибосомами. Затем такая рекомбинантная молекула амплифицируется с помощью универсального и антисмыслового праймеров. Образующийся ПЦР-продукт in vitro транскрибируется в иРНК, а затем транслируется в белок.Англо-русский толковый словарь генетических терминов > PCR-expression
-
48 Pol I
ДНК-полимераза I, Pol I, Корнберга полимераза — фермент E. coli размером в 109 кД. ДНК-п.I необходима для репарации и репликации ДНК in vivo. ДНК-п.I дополнительно обладает 3' → 5'-полимеразной активностью при наличии затравки ( праймера, см.) и матрицы. Фермент обладает 3' → 5'-экзонуклеазной активностью (экзонуклеаза II), что позволяет удалять нуклеотиды с праймерной нити, и 5' → 3'-экзонуклеазной активностью (экзонуклеаза VI), позволяющей удалять нуклеотиды перед растущей праймерной нитью. Широко известен фрагмент в 76 кД этой полимеразы (фрагмент Кленова), обладающий полимеразной и 3' → 5'-экзонуклеазной функциями. Как полный фермент, так и фрагмент Кленова используются для мечения ДНК in vitro методом ник-трансляции и для заполнения 3'-концов в дуплексной молекуле ДНК (см. ДНК-полимеразы).Англо-русский толковый словарь генетических терминов > Pol I
-
49 reverse transcription polymerase chain reaction
Обратных транскриптов полимеразная цепная реакция, кДНК-ПЦР, РНК-ПЦР — процедура амплификации РНК in vitro с использованием ретровирусной обратной транскриптазы или термостабильной Therminus thermophilus (Tth) ДНК-полимеразы для получения кДНК на матрице РНК. кДНК затем амплифицируется методом обычной ПЦР. Tth-обратная транскриптаза катализирует как обратную транскрипцию в присутствии MnCl2, так и амплификацию образовавшейся кДНК в присутствии MnCl2. Более того, ее каталитическая активность не снижается при повышении реакционной температуры с целью дестабилизации вторичной структуры РНК и эффективного отжига праймера. Т.обр., при использовании Tth-фермента все реакции можно осуществить в одной пробирке. РНК-ПЦР позволяет амплифицировать кДНК с очень малых количеств очищенных иРНК, тРНК, рРНК и вирусных РНК, а также обнаруживать специфические РНК при очень малом количестве копий, поэтому метод применяется для анализа экспрессии генов на уровне РНК. РНК-ПЦР-метод можно использовать также и для одновременного изучения трансляции генов in vitro.Англо-русский толковый словарь генетических терминов > reverse transcription polymerase chain reaction
-
50 rhodamin B isothiocyanate
Родамина В изотиоцианат — флуоресцирующий краситель (флуорохром), который может использоваться как маркер для флуоресцентного праймера при автоматическом секвенировании ДНК (см. ДНК-секвенирование).Англо-русский толковый словарь генетических терминов > rhodamin B isothiocyanate
-
51 RNA-PCR
Обратных транскриптов полимеразная цепная реакция, кДНК-ПЦР, РНК-ПЦР — процедура амплификации РНК in vitro с использованием ретровирусной обратной транскриптазы или термостабильной Therminus thermophilus (Tth) ДНК-полимеразы для получения кДНК на матрице РНК. кДНК затем амплифицируется методом обычной ПЦР. Tth-обратная транскриптаза катализирует как обратную транскрипцию в присутствии MnCl2, так и амплификацию образовавшейся кДНК в присутствии MnCl2. Более того, ее каталитическая активность не снижается при повышении реакционной температуры с целью дестабилизации вторичной структуры РНК и эффективного отжига праймера. Т.обр., при использовании Tth-фермента все реакции можно осуществить в одной пробирке. РНК-ПЦР позволяет амплифицировать кДНК с очень малых количеств очищенных иРНК, тРНК, рРНК и вирусных РНК, а также обнаруживать специфические РНК при очень малом количестве копий, поэтому метод применяется для анализа экспрессии генов на уровне РНК. РНК-ПЦР-метод можно использовать также и для одновременного изучения трансляции генов in vitro.Англо-русский толковый словарь генетических терминов > RNA-PCR
-
52 primer-directed DNA sequence analysis
Англо-русский словарь по иммунологии > primer-directed DNA sequence analysis
-
53 primer-extension analysis
анализ методом удлинения затравки [праймера]Англо-русский словарь по иммунологии > primer-extension analysis
-
54 primer-extension method
метод удлинения затравки [праймера] ( метод получения ДНК-копий на матрице мРНК)Англо-русский словарь по иммунологии > primer-extension method
-
55 блуждающий праймер
= "блуждающая" затравка[англ. primer — запал, затравка]праймер, используемый при анализе протяженных неизвестных нуклеотидных последовательностей вокруг секвенированных участков генома (см. праймер-опосредованная прогулка). "Б".п. подбирается на основании секвенированной ранее нуклеотидной последовательности. После секвенирования с помощью этого праймера неизвестного участка ДНК на основании полученных данных синтезируют новый праймер, комплементарный концу уже секвенированного участка, и вновь проводят секвенирование. Процедура продолжается до завершения полного секвенирования длинного фрагмента ДНК.Толковый биотехнологический словарь. Русско-английский. > блуждающий праймер
-
56 блуждающий праймер
= "блуждающая" затравка[англ. primer — запал, затравка]праймер, используемый при анализе протяженных неизвестных нуклеотидных последовательностей вокруг секвенированных участков генома (см. праймер-опосредованная прогулка). "Б".п. подбирается на основании секвенированной ранее нуклеотидной последовательности. После секвенирования с помощью этого праймера неизвестного участка ДНК на основании полученных данных синтезируют новый праймер, комплементарный концу уже секвенированного участка, и вновь проводят секвенирование. Процедура продолжается до завершения полного секвенирования длинного фрагмента ДНК.Толковый биотехнологический словарь. Русско-английский. > блуждающий праймер
-
57 амплимер
[лат. ampli(ficatio) — распространение, увеличение и греч. mer(os) — доля, часть]одноцепочечный олигонуклеотид, используемый в качестве праймера (см. праймер) для ПЦР (см. полимеразная цепная реакция). А. обычно имеет размер от 18 до 25 н.; синтезируется с помощью автоматических синтезаторов ДНК.Толковый биотехнологический словарь. Русско-английский. > амплимер
-
58 асимметричная полимеразная цепная реакция
[греч. a — отрицат. частица и symmetria — соразмерность, строгая правильность в расположении; греч. polymeres — состоящий из многих частей, многообразный; лат. re- — приставка, обозначающая повторность действия и actio — действие]вариант ПЦР (см. полимеразная цепная реакция), при котором концентрация одного из двух праймеров очень низка, и он быстро истощается в ходе реакции. С этого момента синтез ДНК продолжается с одного праймера и нарабатываются одноцепочечные фрагмены ДНК. А.п.ц.р. проводится тогда, когда нужно амплифицировать преимущественно одну из цепей исходной ДНК. Используется в некоторых методиках секвенирования ДНК и гибридизационного анализа.Syn: однонаправленная ПЦРТолковый биотехнологический словарь. Русско-английский. > асимметричная полимеразная цепная реакция
-
59 мегапраймер
фрагмент ДНК длиной от нескольких десятков до нескольских сотен п.н., полученный с помощью ПЦР (см. полимеразная цепная реакция) и коротких мутагенизирующих праймеров (см. праймер (1)), который используют в качестве праймера в следующем раунде ПЦР, напр. в системе направленного мутагенеза (см. направленный мутагенез).Толковый биотехнологический словарь. Русско-английский. > мегапраймер
-
60 олигонуклеотид-лигазный анализ
сокр. ОЛАoligonucleotide ligation assay (сокр. OLA)[греч. oligos — немногочисленный, незначительный, лат. nucleus — ядро и греч. eidos — вид; лат. ligo — связываю; греч. analysis — разложение, расчленение]метод типирования однонуклеотидного полиморфизма генома, основанный на специфическом лигировании олигонуклеотидного праймера, 3'-конец которого соответствует одному из полиморфных вариантов, с другим олигонуклеотидным праймером, мишень для которого расположена сразу же за полиморфным нуклеотидом. При отсутствии замен в мишени оба олигонуклеотида полностью с ней гибридизуются и способны "сшиваться" при добавлении ДНКлигазы; в противном случае сшивание оказывается невозможным.Толковый биотехнологический словарь. Русско-английский. > олигонуклеотид-лигазный анализ
См. также в других словарях:
Метод удлинения затравки м у праймера — Метод удлинения затравки, м. у. праймера * метад падаўжэння запала, м. п. праймера * primer extension method метод получения ДНК копий на матрице мРНК … Генетика. Энциклопедический словарь
ДНК-маркер — Рис.1 Электрофорез ПЦР продуктов в агарозном геле и окрашенных бромистым этидием, полученных методом IRAP амплификации. Левая дорожка ДНК известной длины (от 900 до 3000 пар нуклеотидов) … Википедия
Полимеразная цепная реакция — (ПЦР) экспериментальный метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе). Помимо амплификации ДНК, ПЦР… … Википедия
Виртуальная ПЦР — Виртуальная полимеразная цепная реакция (in silico ПЦР, цифровая ПЦР, электронная ПЦР, е ПЦР) математический метод компьютерного анализа теоретической полимеразной цепной реакции, используя список последовательностей праймеров (или проб)… … Википедия
Аллелоспецифическая полимеразная цепная реакция аллель-с ПцР — Аллелоспецифическая полимеразная цепная реакция, аллель с. ПцР * алеласпецыфічная полімеразная ланцуговая рэакцыя, алель с. ПЛР * allele specific polymerase chain reaction or AS PCR амплификация определенных аллелей, или вариантов… … Генетика. Энциклопедический словарь
ПЦР — Запрос «ПЦР» перенаправляется сюда. Cм. также другие значения. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) экспериментальный метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой… … Википедия
Полимеразная цепная — Запрос «ПЦР» перенаправляется сюда. Cм. также другие значения. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) экспериментальный метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой… … Википедия
GC-состав — В молекулярной биологии, GC состав (или гуанин цитозин состав, ГЦ состав)[1] определяется как процентный состав суммы всех гуанинов (G) и цитозинов (C) по отношению к длине исследуемого участка нуклеиновых кислот. GC состав может относиться к… … Википедия
Секвенирование по Сэнгеру (ферментативный метод) — * секвеніраванне па Сэнгеру (ферментатыўны метад) * Sanger sequencing (enzymatic method) техника секвенирования (см.) однонитчатой ДНК. В основе метода присоединение (отжиг, см.) к однонитчатой ДНК мишени секвенирующего праймера () или обратного… … Генетика. Энциклопедический словарь
Корнберг, Артур — Артур Корнберг англ. Arthur Kornberg … Википедия
Аграновский, Алексей Анатольевич — В Википедии есть статьи о других людях с такой фамилией, см. Аграновский. Доктор Аграновский … Википедия
